תהליך יעיל ובעלות נמוכה לבירור ואולטרה סינון של חלבונים רקומביננטיים המבטאים שמרים
ביטוי שמרים של גנים אקסוגניים יכול לא רק לייצר חלבונים ופפטידים רקומביננטיים, נוגדנים וחיסונים, ציטוקינים, גורמי גדילה, הורמונים וחומרים ביו-אקטיביים אחרים, אלא גם יכול לשמש לייצור אנזימים תעשייתיים, מזון פונקציונלי וחומרים ביולוגיים, שיש להם סיכויי יישום רחבים. .
מערכת ביטוי השמרים כוללת שתי מערכות ביטוי נפוצות, כלומר מערכת ביטוי saccharomyces cerevisiae ומערכת ביטוי שמרים מתנוטרופית. מערכת ביטוי שמרים מתנול היא מערכת ביטוי השמרים הנפוצה ביותר כיום, ופיצ'יה היא הנפוצה ביותר, שיכולה להשתמש במתנול כפחמן ואנרגיה. בנוסף, ישנם שמרים של הנסן, ספארוידים וכן הלאה.
לא משנה איזה סוג של מערכת ביטוי שמרים, תהליכי ההפרדה והטיהור שלה במורד הזרם דומים, וזרימת התהליך הספציפית לוקחת כדוגמה ביטוי שמרים של חלבונים רקומביננטיים ותרופות פוליפפטידיות.
קלטות ממברנות מיקרו-סינון מנחה מאמצות ערוץ זרימה פתוח ומצב סינון זרימה משיקית, שיכולים לעבד ביעילות נוזל הזנה מורכב כמו נוזל תסיסה של שמרים ונוזל פיצוח E. coli במהירות גבוהה, ויכול להבטיח הגברה ליניארית מבדיקה קטנה לקנה מידה ייצור. עיצוב מודולרי קומפקטי, חיבור צנרת פשוט, עצמאות וקריאה של המערכת יכולים להגן על המפעילים ולמנוע זיהום ביולוגי. וללא אימות תחזוקה וניקיון. לכן, הוא מתאים מאוד לשלב ההבהרה של עיבוד מוקדם במורד הזרם.
המטרה העיקרית של תהליך UF/DF היא הסרת זיהומים ועקירת מאגרים. לקסטת ממברנת אולטרה-פילטרציה מנחה יש הומוגניות טובה של גודל נקבוביות הממברנה והידרופיליות חזקה, מה שיכול להעניק לממברנה שטף גבוה יותר וספיחת חלבון נמוכה יותר, ועיצוב ערוץ זרימה אופטימלי, עם ירידת לחץ קטנה יותר, העברת חומר קלה וקיצור משמעותי של זמן הסינון. יתרה מכך, סדרת המוצרים שלמה וגמישה כדי לענות על הצרכים של יישומים שונים בקנה מידה שונה. לכן, הוא מתאים מאוד לשלב UF/DF של עיבוד במורד הזרם.
להלן מקרה היישום של קרום Guidlingקַלֶטֶתבביטוי שמרים של חלבונים רקומביננטיים.
בירור מיקרופילטרציה
השתמשנו ב-{{0}}.11 מטר מרובע 0.22μm ממברנה קסטת נקבוביות כדי להבהיר נוזל תסיסה שמרים 1.5L (משקל מולקולרי חלבון יעד 42-55 KD) על ידי מיקרו סינון. בכל תהליך המיקרופילטרציה נחקרו קצב ההחלמה של חלבון המטרה, שינוי עכירות ודלדול שטף הממברנה.
0-17דקה היא תהליך הריכוז, 17-32דקה היא תהליך הכביסה והסינון. במהלך כל תהליך המיקרו-סינון, TMP גדל בהדרגה, מהירות כניסת הנוזל נותרה ללא שינוי, ושטף החומר הממוצע היה 45LMH.
העכירות של הנוזל הייתה 600NTU לפני מיקרו-סינון ו-8NTU לאחר מיקרו-סינון, והעכירות השתנתה באופן ברור.
התוצאות הראו שהתשואה של חלבון המטרה הייתה > 90%. קלטת ממברנה של Guidling Technology 0.22μm יציבה ומתאימה לתרחיש יישום זה.
ריכוז אולטרה סינון
ריכוז אולטרה-פילטרציה של 1.5L נוזל מובהר (משקל מולקולרי חלבון יעד 42-55kd) בוצע באמצעות 0.11 מטרים רבועים של קלטת ממברנה של 10kd. בכל התהליך של סינון אולטרה, נחקרו שיעור ההחלמה של חלבון המטרה, דלדול שטף הממברנה וקצב התאוששות שטף המים.
לפני ואחרי השימוש, שיעור ההחלמה של הממברנה יכול להגיע ל-90%.
0-15דקה היא תהליך הריכוז, 15-18דקה היא תהליך החלפת הנוזלים. במהלך כל תהליך סינון האולטרה, TMP גדל בהדרגה, מהירות כניסת הנוזל נותרה ללא שינוי, ושטף החומר הממוצע היה 50LMH.
התוצאות הראו שחלבון המטרה נלכד לחלוטין. קלטות ממברנות של Guidling Technology 10kd יכולות לפעול ביציבות ומתאימה לתרחיש יישום זה.
רוב החלבונים הרקומביננטיים המובעים על ידי שמרים לא באו לידי ביטוי גבוה. ברור שהעכירות של הנוזל המסונן ירדה וקצב החלמת החלבון היה גבוה יותר. מכיוון שהזמן הכרומטוגרפי שלאחר מכן ארוך מדי, זה יגרום להשפעות שליליות על החלבון, על מנת לקצר את זמן הדגימה הכרומטוגרפית, ניתן להוסיף שלב אחד של ריכוז אולטרה סינון, ולרכז את חלבון המטרה במהירות לאחר הדגימה, מה שיכול להתווסף. להשיג את המטרה של חיסכון בזמן, להפחית את נפח המילוי ובכך להפחית את עלות הייצור.
קלטות ממברנות מיקרו-פילטרציה של Guidling Technology יכולות בדרך כלל להפחית את העכירות של נוזל ההזנה לפחות מ-20NTU, ולספק באופן מלא את הצרכים של סינון אולטרה וכרומטוגרפיה שלאחר מכן. שיעור התאוששות אולטרה סינון של קלטות ממברנות אולטרה סינון ישתנה עקב חומרים שונים, שיעור ההחלמה הכללי יכול להגיע ל-90-95%.
Guidling Technology מזמינה אותך לבקש ערכות בדיקה להערכה קשורה.
לגבי Guidling
Guidling Technology הוא מיזם היי-טק לאומי המתמקד בביו-פרמצבטיקה, תרבית תאים, טיהור וריכוז של ביו-רפואה, אבחון ונוזלים תעשייתיים. פיתחנו בהצלחה מכשירי סינון צנטריפוגליים, קלטות אולטרה סינון ומיקרו סינון, מסנן וירוסים, מערכת TFF, מסנן עומק, סיבים חלולים וכו' העונים במלואם על תרחישי היישום של ביו-פרמצבטיקה, תרבית תאים וכן הלאה. הממברנות ומסנני הממברנות שלנו נמצאים בשימוש נרחב בריכוז, מיצוי והפרדה של סינון מקדים, מיקרו-פילטרציה, אולטרה-פילטרציה וננו-סינון. קווי המוצרים הרבים שלנו, החל מסינון מעבדה קטן וחד פעמי ועד למערכות סינון ייצור, בדיקות סטריליות, תסיסה, תרבית תאים ועוד, עונים על צורכי הבדיקה והייצור. Guidling Technology מצפה לשתף פעולה איתך!