תשובות לשאלות מקצועיות של צינור צנטריפוגלי אולטרה-סינון

1. מהו חומר הממברנה של צינור הסינון האולטרה?

לקרום פוליאתרסלפון יש יירוט משקל מולקולרי ברור ומדויק, תכונות פיזיות וכימיות יציבות, ספיחת חלבון נמוכה במיוחד והתאוששות גבוהה של המוצר

2. אם חלבונים עם משקלים מולקולריים שונים צריכים להיות מופרדים, כמה הבדל צריך המשקל המולקולרי של חלבונים?

שני החלבונים צריכים להיות שונים פי 10 או יותר בגודלם

3. האם צינור צנטריפוגה אולטרה-סינון יכול לשמש לריכוז וירוסים?

צינור צנטריפוגות אולטרה-סינון יכול לרכז את הנגיף פעמים רבות או אפילו גבוהות. יש לנו ממברנה מיוחדת לוירוס. וירוסים שונים צריכים לבחור את גודל נקבוביות הממברנה המתאים

4. האם ניתן לחטא את צינור צנטריפוגות הסינון האולטרה-סינון ועמיד בפני אלקלי?

זה יכול להיות מחוטא עם 75% פתרון מימית אתנול. החומר שלנו יכול לעמוד 0.1-0.5n נתרן הידרוקסיד אלקליין כביסה

5. ניתן להשתמש בצינור צנטריפוגות אולטרה-סינון לעיקור בלחץ גבוה

יש לנו צינור צנטריפוגה אולטרה-סינון מיוחד המתאים לעיקור בלחץ גבוה

6. בהתחשב ביציבות החלבון, האם ניתן לצנטר את צינור הסינון האולטרה בטמפרטורה נמוכה?

כן, החומר שלנו עמיד לטמפרטורה נמוכה, אבל זמן הריכוז יהיה ארוך יותר. מהירות הסינון של הממברנה קשורה לטמפרטורת נוזל ההזנה

7. על שיעור ההחלמה

בדרך כלל, שיעור ההתאוששות של מסיסים עם ריכוז גדול מ 0.1mg/ml הוא 90% או יותר. בדרך כלל, אובדן דגימות נגרם על ידי ספיחה לא ספציפית על פני השטח של קרום המסנן ואת פני השטח של צינור החומר. על מנת להשיג שיעור התאוששות גבוה, המשקל המולקולרי הנשמר של קרום המסנן שנבחר הוא כ 1 / 3 של חלבון היעד, קרום ultrafiltration הוא קרום אסימטרי, גודל הנקבוביות שלה מופץ בדרך כלל, וזה עלול לדלוף תחת לחץ גבוה צנטריפוגלי. במצב זה, נוזל החלבון עשוי להיות מעוות, ולכן, ככל שצמצם היירוט קטן יותר, כך קצב הזרימה איטי יותר, אך קצב ההתאוששות יהיה גבוה יותר

8. כאשר חלבון מרוכז, יש משקעים. איך להתמודד עם זה?

אם החלבון מרוכז מהר מדי או יותר מדי, הוא עלול לגרום למשקעי חלבון. הריכוז הסופי לאחר ריכוז חלבון לא צריך להיות גבוה מדי; עבור חלבונים הרגישים לקצב הריכוז וקלים לזרז, שיטות השיפור המוצעות הן כדלקמן:

1) להפחית את המהירות הצנטריפוגלית,

2) השתמש בקרום סינון אולטרה עם משקל מולקולרי גדול יותר

3) לפוצץ ולמצוץ את צינור הריכוז ולאחר מכן צנטריפוגה

9. מהן הסיבות האפשריות מדוע צינור צנטריפוגות אולטרה-סינון לא יכול להיות צנטריפוגה למטה?

אם לא ניתן לצנטריפוגה של צינור הסינון האולטרה-מסנן, ניתן לבצע את הצנטריפוגה הראשונית עם פתרון מימי של כ-20% אתנול, מכיוון שלאחר שקרום הסינון האולטרה מיובש לחלוטין, משטח הממברנה הוא הידרופובי חלש, וניתן לשחזר את השטף לאחר השריה עם ממס מתח משטח נמוך

10. שימוש נכון ושימור של צינור אולטרה-סינון

צינור הסינון האולטרה-סינון יהיה בתחילה צנטריפוגה עם מים מטוהרים לפני השימוש כדי לאמת את שלמותו. לאחר כל שימוש, הוא נדרש לאחסן אותו במצב רטוב כדי למנוע את התייבשות הממברנה

11. כיצד להסיר אנדוטוקסין מצינור סינון אולטרה?

צינור הסינון האולטרה-סינון המסופק על ידינו לא טופל באנדוטוקסין. יחד עם זאת, בשל קיומו הנרחב של אנדוטוקסינים בטבע, דגימות הדורשות רעלנים פנימיים ניתן לנקות מראש עם 0.5N נתרן הידרוקסיד לפני הניסוי, ולאחר מכן לנקות עם מי RO כדי להסיר את רוב אנדוטוקסין

12. כאשר החלבון המרוכז מנותח במורד הזרם, נמצא כי יש הפרעה. מה הסיבה?

צינור הסינון האולטרה ניתן לנקות מראש עם חוצץ או מים מטוהרים. אם ההפרעה עדיין קיימת, נקה אותו עם 0.1N נתרן הידרוקסיד, ולאחר מכן לנקות אותו עם מים מטוהרים

13. ייתכנו סופגים לא ספציפיים בין חלבון היעד לבין קרום הסינון האולטרה בתהליך הריכוז. כיצד לשפר את זה?

אנו משתמשים קרום פוליאתרסולפון הידרופילי, אבל עבור חלבונים מסוימים עם תכונות מיוחדות, הספיחה הלא ספציפית שלהם עם הממברנה עשוי להיות משופר. במקרה זה, אנו יכולים לנסות לטפל מראש בצינור הסינון האולטרה לפני הניסוי, או ליצור קשר עם המהנדס שלנו

14. לאחר הריכוז, נמצא כי אין חלבון יעד בתרכיז. מהן הסיבות האפשריות?

1) הריכוז הראשוני של חלבון לא צריך להיות נמוך מדי. אם הריכוז נמוך מדי, ייתכן שהממברנה לא תישמר

2) בחר את גודל נקבובית הממברנה המתאים. צנטריפוגה וריכוז של צינור סינון אולטרה-סינון שייכים לסינון ללא מוצא. גודל נקבובית הממברנה הוא בדרך כלל פחות מפי 2 או יותר מחלבון היעד

3) בחר מהירות צנטריפוגלית מתאימה

4) האם חלבון היעד מזרז