CM Weak Ion-כרומטוגרפיה של ממברנה חילופי

SP Strong Cation Exchange Membrane Chromatography מבוא למוצר 

 

2. יתרונות המוצר

מהיר ויעיל יכולת קשירה גבוהה יכולה להיות מושגת בקצבי זרימה מהירים עד פי 40 מכרומטוגרפיה מסורתית של שרף. בהשוואה לכרומטוגרפיה רגילה מבוססת שרף-, ניתן להפחית פי 30-40 את זמן התהליך באמצעות כרומטוגרפיה ממברנה. קצב הזרימה הטיפוסי הוא בסביבות 10 MV/min.

2.2 יעילות כריכה גבוהה כרומטוגרפיה של ממברנה מציגה יכולת קישור גבוהה וקצבי זרימה גבוהים בירידה בלחץ נמוכה, מה שמאפשר לכידת ביו-מולקולות טעונות במעבר יחיד דרך המודול.

2.3 ניתן להרחבה וגמיש המגוון המלא של מוצרי כרומטוגרפיה ממברנות יכול לענות על הצרכים המגוונים של טיהור ביו-מולקולות, לכסות יישומים מפיתוח תהליכים ועד לייצור בקנה מידה- גדול. עיצוב הקפסולה מאפשר הפעלה חד פעמית- או שניתן לנקות ולעשות שימוש חוזר לאחר הליכי ניקוי מתאימים.

2.4 פרודוקטיביות משופרת העיצוב הקומפקטי ממזער את טביעת הרגל של המתקן. על ידי ביטול פעולות כמו אריזת עמודות, ניקוי, אימות ניקוי ואחסון עמודות, העיבוד יכול להתחיל לאחר איזון פשוט עם פחות חיץ יחסית. מכיוון שאין צורך באריזת עמודים, ניקוי או אחסון, ניתן להוזיל את עלויות העבודה ביותר מ-50%.

 

 

3 פרמטרים טכניים

3.1 חומרים מבניים

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם טייס	סולם ייצור
נפח הממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	140 מ"ל	5L
מבנה תמיכת ממברנה	פוליפרופילן
בית ממברנה	פוליפרופילן
או טבעת	סיליקון

3.2 מאפייני תפעול

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם טייס	סולם ייצור
נפח הממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	400 מ"ל	5L
קצב זרימה מומלץ	1-6 מ"ל/דקה	25-150 מ"ל/דקה	2-12 ליטר לדקה	25-150 ליטר לדקה
טמפרטורת עבודה מקסימלית	35 מעלות
לחץ הפעלה מקסימלי	3 בר (25 מעלות)
הפרש לחץ מקסימלי	3 בר (25 מעלות)
תנאי אחסון	20% ethanolaqueoussפתרון

השוואה מראה שחיי השירות של כרומטוגרפיה של ממברנות SP דומה לזה של SP Sepharose 6FF.

איור 1. שינויים בקיבולת הקישור של כרומטוגרפיית ממברנה SP לאחר שימושים מרובים שנבדקו עם ליזוזים

בנוסף, הערכנו את הכרומטוגרפיה של הממברנה על יעילותה בהסרת חלבוני תא מארח וחומצות גרעין. התוצאות הן כדלקמן:

	DNA				HCP
	שחזור IgG	תוכן (pg/mg of IgG) לפי RT PCR		גורם הסרה	תוכן (ng/mg of IgG) מאת אליסה		גורם הסרה
לָרוּץ	%	לפני Q ממברנה	אחרי Q ממברנה	עֵץ	לפני Q ממברנה	אחרי Q ממברנה	עֵץ
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

טבלה 1. שיעורי הסרת חלבון DNA וחלבון תאי מארח ב-CHO-חומר IgG מפורש באמצעות כרומטוגרפיה ממברנה SP

סדרה של ניסויים הדגימה שכרומטוגרפיה של ממברנות SP יכולה להסיר ביעילות מזהמים תוך שמירה על קצב התאוששות גבוה של IgG היעד.

כאשר משווים את כרומטוגרפיית הממברנה של Gudiling SP עם מותגים מיובאים, נתוני קיבולת הקישור הם כדלקמן:

כְּרִיכָהcיכולת (מ"ג/מ"ל)	סרטוריוס	לְעַיֵף	מנחה
ליזוזים	25	32	29
טריפסין	22	27	25

טבלה 2. ביצועי קיבולת קישור של חלבונים שונים במוצר שלנו ובמותגים המתחרים

הערכה כוללת מראה כי יכולת הכריכה שלנו דומה לזו של מוצרים מיובאים.

איור 2. בדיקת קיבולת חיבור של מודול כרומטוגרפיה ממברנה SP באמצעות ליזוזים כסטנדרט

בהשוואה ליכולת קשירה דינמית ומוצרים מיובאים, אושר שניתן ללכוד את רוב חלבוני המטרה כאשר ליזוזים נפלט ב-190 mM NaCl.

באמצעות תנאי חלוקה שונים, מצאנו שפרופילי הגלישה של כרומטוגרפיה של הממברנה דומים לאלו של ג'ל אגרוז, אך טוהר החלבונים משתנה באופן משמעותי בריכוזי מלחים שונים. במחקר ופיתוח ובייצור בפועל, יש צורך לקבוע כמותית את תנאי הפליטה האופטימליים כדי להשיג חלבוני יעד ברמת טוהר- גבוהה.

 

4 מקרי יישום אופייניים

הסרה של DNA, וירוסים וחלבוני התא המארח

לכידת פלסמידים, וירוסים, חלבונים וטיהור אוליגונוקלאוטידים

הסרת פיגמנטים ממרק התסיסה של שמרים ולכידת חלבון-גבוהה

 

5 נוהל שימוש

5.1 הכנה והרכבה של ציוד:

5.1.1:התקן את מודול הכרומטוגרפיה של הממברנה על מערכת כרומטוגרפיה ÄKTA בצע נהלים דומים לעמודי שרף, תוך הקפדה על כיוון הזרימה מיושר עם חיצי המודול וכיוון הכניסה. חבר את המודול באמצעות מנעולי Luer או אביזרי מהדק בסגנון -לשילוב מאובטח במערכת.

5.1.2 הגדר את קצב זרימת ההזנה ל5-10 MV/דקהוהוצאת גז של המודול באמצעות חיץ שיווי משקל, כדי להבטיח שהקולחים יהיו נקיים מבועות אוויר. לאחר שחרור הגזים, חבר את מוצא החדיר למערכת הכרומטוגרפיה.

5.2:טיפול לפני-שימוש:

5.2.1:

הגדר את קצב זרימת ההזנה ל5-10 MV/דקהולבצע{0}}טיפול מקדים עם0.5 M NaOH עבור יותר מ- 5 MV, להבטיח שהממברנה מגיעה לשיווי משקל מלא.

5.2.2: באותו קצב זרימה, בצע -טיפול מקדים עם1 M NaCl עבור יותר מ- 5 MVכדי להבטיח שהממברנה תגיע לשיווי משקל מלא.

5.3 תהליך כרומטוגרפיה

5.3.1 הגדר את קצב זרימת ההזנה ל-5-10 MV/דקה ושיווי משקל של הממברנה עם חיץ שיווי משקל במשך יותר מ- 5 MV, עד שהממברנה מגיעה לשיווי משקל מלא.

5.3.2 לאחר סינון קדם- של 0.22 מיקרומטר, טען את הדגימה על הממברנה עד להשלמת טעינת הדגימה או הגעה ליכולת הקישור הכרומטוגרפית.

5.3.3 שטפו עם חיץ שיווי משקל במשך יותר מ-10 MV עד שאות ה-UV יחזור לקו הבסיס.

5.3.4 החל שחרור שיפוע או שחרור שלב בהתאם לתכנון התהליך, ואסוף שברים לפי הצורך.

5.4 CIP Post-טיפול בשימוש - התקן כרומטוגרפיה ממברנה CIP (ניקוי במקום)

5.4.1 הגדר את קצב זרימת ההזנה ל-5-10 MV/דקה ובצע ניקוי עם 1 M NaOH במשך יותר מ- 10 MV, עד שאות ה-UV יורד מתחת לקו הבסיס.

5.4.2 לאחר מחזור במשך 30 דקות, עבור לשטיפת מים עד שה-pH מגיע ל-7-8, ולאחר מכן המשך לנקות עם 20% אתנול עד שהמוליכות הופכת כמעט קבועה.

אחסון 5.5 כרומטוגרפיה ממברנה

לאחר השימוש והשלמת ה-CIP, ניתן להסיר את מודול הממברנה ולאחסן אותו על ידי השרייה ב-20% אתנול, או שניתן לאחסן אותו ב-שורה בטמפרטורת החדר בתמיסה המכילה 20% אתנול. יש לבדוק את תמיסת האתנול 20% ולהחליפה מעת לעת.

 

6. מידע הזמנה

Q Strong Anion Exchange Membrane Chromatography מסנן כמוסות

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם טייס	סולם ייצור
דגם מוצר	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
נפח ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	400 מ"ל	5L

תגיות פופולריות: ס"מ כרומטוגרפיה של ממברנות החלפת יונים-חלשות, סין, ספקים, יצרנים, מפעל, סיטונאי, בתפזורת, במלאי, דוגמה חינם