SP Strong Cation Exchange Membrane Chromatography

מבוא ל-CM Weak Ion-מוצרי כרומטוגרפיה של ממברנה חילופי

 

1. סקירה כללית

כרומטוגרפיה של חילופי קטונים חלשים- של CM היא טכנולוגיית טיהור שבה קבוצות קרבוקסימטיל מחוברות על גבי הממברנה ליצירת מודול פונקציונלי. ההפרדה מושגת על סמך ההבדלים בתכונות המטען ובצפיפות המטען של ביומולקולות שונות. מכיוון שרוב המקרומולקולות הביולוגיות מכילות קבוצות קרבוקסיל או הידרוקסיל, ניתן להתאים את מאפייני המטען שלהן וגודלן על ידי שינוי ערך ה-pH של תמיסת המאגר. לאחר שהביו-מולקולות נקשרות למודול הממברנה הנושא מטענים מנוגדים, אלוציה מתבצעת על ידי שינוי החוזק היוני או ה-pH של הפאזה הניידת. מולקולות בעלות זיקה קשירה חלשה יותר נפלטות תחילה, בעוד אלו עם זיקת קשירה חזקה יותר נפלטות מאוחר יותר, ובכך משיגות הפרדה יעילה.

 

2. יתרונות המוצר

2.1 מהיר ויעיל: ניתן להשיג קיבולת קשירה גבוהה בקצבי זרימה מהירים עד פי 40 מכרומטוגרפיה רגילה המבוססת על שרף-. בהשוואה לכרומטוגרפיה מסורתית של מיטה ארוזה-, כרומטוגרפיה של ממברנה יכולה לקצר את זמן התהליך פי 30-40. קצב זרימת ההפעלה הטיפוסי הוא 10 MV/min.

2.2 יעילות כריכה גבוהה: כרומטוגרפיה של ממברנה מדגימה יכולת טעינה גבוהה וקצבי זרימה גבוהים בתנאי נפילת לחץ נמוכה, מה שמאפשר לכידת ביו-מולקולות טעונות במעבר יחיד דרך המודול.

2.3 ניתן להרחבה וגמיש: המגוון המלא של מוצרי כרומטוגרפיית ממברנות יכול לענות על צורכי עיבוד ביו-מאקרומולקולות מגוונים, לכסות שלבים מפיתוח תהליכים ועד לייצור בקנה מידה- גדול. עיצוב הקפסולה מאפשר יישומים חד פעמיים- או שניתן לנקות ולעשות שימוש חוזר לפי הצורך.

2.4 פרודוקטיביות מוגברת: העיצוב הקומפקטי ממזער את טביעת הרגל של המתקן. על ידי ביטול שלבי אריזת העמודות, הניקוי, אימות הניקוי ואחסון העמודות, העיבוד יכול להתחיל לאחר איזון עם נפח קטן יחסית של חיץ. ללא צורך באריזת עמודות, ניקוי או אחסון, ניתן להוזיל את עלויות העבודה בשיעור של עד יותר מ-50%.

 

3 פרמטרים טכניים

3.1 חומרים מבניים

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם פיילוט	סולם ייצור
נפח ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	140 מ"ל	5L
מבנה תמיכת ממברנה	פוליפרופילן
שיכון ממברנה	פוליפרופילן
או טבעת	גומי סיליקון

3.2 מאפייני תפעול

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן-	סולם טייס-	סולם ייצור
נפח ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	400 מ"ל	5L
קצב זרימה מומלץ	1-6 מ"ל/דקה	25-150 מ"ל/דקה	2-12 ליטר לדקה	25-150 ליטר לדקה
טמפרטורת עבודה מקסימלית	35 מעלות
לחץ הפעלה מקסימלי	3 בר (25 מעלות)
הפרש לחץ מקסימלי	3 בר (25 מעלות)
תנאי אחסון	תמיסה מימית של 20% אתנול

בהשוואה למדיה קונבנציונלית, חיי השירות של כרומטוגרפיה של ממברנות CM דומה לזה של CM agarose gel 6FF.

איור 1. שינויים ביכולת הטעינה של כרומטוגרפיה של ממברנות CM לאחר שימושים מרובים בבדיקת ליזוזים.

בנוסף, הערכנו את יעילות ההסרה של חלבוני תא מארח וחומצות גרעין על ידי כרומטוגרפיה ממברנה. התוצאות מוצגות להלן.

טבלה 1. שיעורי הסרה של DNA וחלבוני תא מארח בחומר IgG שהביע CHO-באמצעות כרומטוגרפיה של ממברנה CM

סדרה של ניסויים הראתה שכרומטוגרפיה של ממברנות CM יכולה להסיר ביעילות מזהמים תוך שמירה על קצב התאוששות גבוה של יעד IgG

	DNA				HCP
	שחזור IgG	תוכן (pg/mg of IgG) לפי RT PCR		גורם הסרה	תוכן (ng/mg of IgG) מאת אליסה		גורם הסרה
לָרוּץ	%	לפני Q ממברנה	אחרי Q ממברנה	עֵץ	לפני Q ממברנה	אחרי Q ממברנה	עֵץ
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

באמצעות כרומטוגרפיה של ממברנות Gudiling CM בהשוואה למותגים אחרים, נתוני קיבולת הטעינה מוצגים להלן.

קיבולת טעינה (מ"ג/מ"ל)	Jingbiao 1	מנחה
ליזוזים	18	23
טריפסין	17	20

טבלה 2. ביצועי טעינה של חלבונים שונים במוצר שלנו בהשוואה למוצרים מתחרים

הערכה כוללת מראה כי יכולת ההעמסה שלנו דומה לזו של מוצרים מיובאים.

איור 2. בדיקת קיבולת הטעינה של מודול הכרומטוגרפיה של ממברנה CM באמצעות ליזוזים כחלבון סטנדרטי.

כמו כן, כושר ההעמסה הדינמי הושווה לזו של מוצרים מיובאים. אימות הראה שניתן לפלוט ליזוזים באמצעות 160 mM NaCl, המאפשר לכידה יעילה של רוב חלבוני המטרה.

באמצעות אופטימיזציה של תנאי חלוקה שונים, מצאנו כי כרומטוגרפיה של ממברנה מציגה התנהגות חלוקה דומה לכרומטוגרפיה של אגרוז ג'ל, שבה טוהר החלבון משתנה באופן משמעותי בריכוזי מלח שונים. במו"פ ובייצור מעשיים, יש צורך לקבוע באופן כמותי את תנאי השחרור בשיווי המשקל כדי להשיג חלבון יעד בטוהר- גבוה.

 

4. מקרי יישום אופייניים

• הסרת DNA, וירוסים וחלבוני התא המארח
• לכידה של פלסמידים, וירוסים וחלבונים, כמו גם טיהור של אוליגונוקלאוטידים
• דהיית צבע של מרק התסיסה של שמרים ולכידת חלבון-ביכולת גבוהה

 

5. נוהל הפעלה / זרימת עבודה

5.1: הכנת ציוד והרכבה:

5.1.1: התקן את מודול הכרומטוגרפיה הממברנה על מערכת כרומטוגרפיה של AKTA. שיטת ההתקנה דומה למדיה ארוזה לכרומטוגרפיה במיטה-; ודא שכיוון הזרימה עוקב אחר החץ המסומן על המודול. ניתן לחבר את המודול באמצעות מחברי Luer או מחברי מהדק.

5.1.2 הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/min והשתמש במאגר שיווי משקל כדי לנקות אוויר מהמודול. המשך לשטוף עד שלא נצפו בועות ביציאה, ואז חבר את מוצא החדיר למערכת הכרומטוגרפיה.

5.2.:הכנה-לפני השימוש

5.2.1: הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/דקה ובצע טיפול מקדים באמצעות 0.5 M NaOH עבור יותר מ- 5 MV כדי להבטיח שהממברנה תגיע לשיווי משקל.

5.2.2: באותם תנאי קצב זרימה, בצע טיפול מקדים עם 1 M NaCl עבור יותר מ- 5 MV כדי להבטיח שהממברנה תגיע לשיווי משקל.

5.3. תהליך כרומטוגרפיה

5.3.1 הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/min ובצע טיפול- מקדים עם חיץ שיווי משקל במשך יותר מ- 5 MV עד שהממברנה מגיעה לשיווי משקל.

5.3.2 לאחר סינון קדם- של 0.22 מיקרומטר, טען את הדגימה על העמודה והמשך עד שהדגימה כולה הוחלה או שמגיעים לקיבולת הטעינה של הכרומטוגרפיה.

5.3.3שטוף עם חיץ איזון ליותר מ-10 MV עד שערך ה-UV יורד לקו הבסיס.

5.3.4 בהתאם לתכנון התהליך, יש ליישם פליטת שיפוע או מערכת פליטה ליניארית, ולאסוף שברים במקטעים לפי הצורך.

5.4 טיפול ב-CIP לאחר-שימוש - CIP (נקה-ב-מקום) עבור מערכת כרומטוגרפיה ממברנה.

5.4.1 הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/דקה וטפל עם 1 M NaOH במשך יותר מ- 10 MV עד שערך ה-UV יורד מתחת לקו הבסיס.

5.4.2 לאחר 30 דקות של כביסה במחזור, יש לשטוף במים עד שה-pH הוא בין 7 ל-8, ולאחר מכן לעבור ל-20% אתנול ולהמשיך בניקוי עד שהמוליכות נשארת כמעט ללא שינוי.

אחסון כרומטוגרפיה של ממברנה 5.5

לאחר השימוש והשלמת ה-CIP, ניתן להסיר את מודול הממברנה ולאחסן אותו על ידי השרייה ב-20% אתנול, או לאחסן באינטרנט בטמפרטורת החדר בתמיסה המכילה 20% אתנול. את תמיסת האתנול 20% יש לבדוק ולהחליף באופן קבוע.

 

6, מידע על הזמנה

מסנן קפסולות כרומטוגרפיה מסוג CM-חלש קטיון חלש

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם פיילוט	סולם ייצור
דֶגֶם	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
אזור ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	400 מ"ל	5L

תגיות פופולריות: sp strong chromatography chromatography, סין, ספקים, יצרנים, מפעל, סיטונאי, בתפזורת, במלאי, מדגם חינם