DEAE כרומטוגרפיית ממברנה חלשה של אניונים חלשים

DEAE כרומטוגרפיית ממברנה חלשה של אניונים חלשים - מבוא למוצר

 

1. סקירה כללית

כרומטוגרפיית חילופי אניונים חלשה של DEAE היא טכניקת טיהור המבוססת על הבדלים בתכונות המטען ובצפיפות המטען של ביומולקולות שונות. מכיוון שרוב הביומקרומולקולות מכילות קבוצות פונקציונליות כגון קבוצות קרבוקסיל או הידרוקסיל, ניתן להתאים את מאפייני המטען והגודל שלהן על ידי שינוי ה-pH של תמיסת המאגר. לאחר שביו-מולקולות נקשרות למדיום חילופי אניונים או קטונים בעלי מטען הפוך, ההפרדה מושגת על ידי שינוי החוזק היוני או ה-pH של הפאזה הניידת. מולקולות בעלות זיקת קשירה חלשה יותר נפלטות תחילה, ואחריהן מולקולות בעלות זיקת קשירה חזקה יותר, ובכך משיגות הפרדה יעילה

 

2. יתרונות המוצר

2.1 יעילות גבוהה: משיג חיבור חזק בקצבי זרימה גבוהים עד פי 40 מכרומטוגרפיה מבוססת שרף-. בהשוואה לכרומטוגרפיה מסורתית של מיטה ארוזה-, כרומטוגרפיה של ממברנות מקצרת את זמן התהליך הכולל בכ-30-40 פעמים.

2.2 יעילות כריכה גבוהה: כרומטוגרפיה של ממברנה מציגה יכולת קשירה גבוהה וקצב זרימה גבוה תחת ירידת לחץ נמוכה, המאפשרת לכידת ביומולקולות טעונות במעבר אחד בעמודה.

2.3 ניתן להרחבה וגמישות: הסדרה המלאה של מוצרי כרומטוגרפיית ממברנות יכולה לענות על צורכי טיהור ביו-מקרומולקולות מגוונים, המכסה את כל השלבים מפיתוח תהליך ועד לייצור בקנה מידה גדול.- העיצוב המבני מסוג -קפסולה תומך הן בפעולה- חד פעמית והן בשימוש חוזר לאחר הניקוי.

2.4 פרודוקטיביות משופרת: העיצוב הקומפקטי ממזער את טביעת הרגל של המתקן. על ידי ביטול הליכי אריזת עמודות, ניקוי, אימות ניקוי ואחסון עמודות, ניתן להפעיל את המערכת ישירות לאחר איזון חיץ ללא אריזת עמודות או אחסון. ניתן להוזיל את עלויות העבודה עד 50%.

 

3. פרמטרים טכניים

3.1 חומרים מבניים

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם טייס	סולם ייצור
נפח ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	140 מ"ל	5L
מבנה תמיכת ממברנה	פוליפרופילן (PP)
שיכון ממברנה	פוליפרופילן (PP)
או טבעת	סיליקון

3.2 מאפייני הפעלה

	סולם מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם טייס	סולם ייצור
נפח ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	400 מ"ל	5L
קצב זרימה מומלץ	1-6 מ"ל/דקה	25-150 מ"ל/דקה	2-12 ליטר לדקה	25-150 ליטר לדקה
טמפרטורת עבודה מקסימלית	35 מעלות
לחץ הפעלה מקסימלי	3 בר (25 מעלות)
לחץ דיפרנציאלי מרבי	3 בר (25 מעלות)
תנאי אחסון	20%乙醇水溶液 תמיסה מימית אתנול 20%

איור 1. שינויים בקיבולת העמסת כרומטוגרפיה של הממברנה לאחר שימושים מרובים המנוטרים עם BSA.

בנוסף, הערכנו את יעילות ההסרה של חלבוני תא מארח וחומצות גרעין באמצעות כרומטוגרפיה של ממברנות DEAE. התוצאות הן כדלקמן.

	DNA				HCP
	שחזור IgG	תוכן (pg/mg of IgG) לפי RT PCR		גורם הסרה	תוכן (ng/mg of IgG) מאת אליסה		גורם הסרה
לָרוּץ	%	לפני ממברנה DEAE	אחרי ממברנה DEAE	עֵץ	לפני ממברנה DEAE	אחרי ממברנה DEAE	עֵץ
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

טבלה 1. שיעורי הסרה של DNA וחלבוני תא מארח מ-CHO- הביעו IgG באמצעות כרומטוגרפיה של ממברנה DEAE.

סדרה של ניסויים הדגימה שכרומטוגרפיה של ממברנות Q יכולה להסיר ביעילות זיהומים, תוך שמירה על קצב התאוששות גבוה של IgG היעד.

בנוסף, השווינו את כרומטוגרפיית הממברנה של Gudiling עם מותגים מיובאים, ונתוני קיבולת הטעינה הם כדלקמן.

איור 2. ביצועי טעינה של חלבונים שונים על כרומטוגרפיית הממברנה שלנו ומוצרים מתחרים

הערכה כוללת מראה כי יכולת ההעמסה שלנו דומה לזו של מוצרים מיובאים.

איור 3. ביצועים של מודול כרומטוגרפיה של ממברנה DEAE בבדיקת חלבון קולגן

באמצעות מודול הכרומטוגרפיה של הממברנה DEAE, תוצאות האימות הראו שניתן ללכוד את רוב חלבוני הקולגן היעד ולסלק אותם באמצעות 135 mM NaCl.

באמצעות בדיקה בתנאי חלוקה שונים, מצאנו שכרומטוגרפיה של ממברנות וכרומטוגרפיה של ג'ל אגרוז מציגים התנהגות חלוקה דומה, שבה טוהר החלבון משתנה באופן משמעותי בריכוזי מלח שונים. במו"פ ובייצור מעשיים, יש צורך לקבוע באופן כמותי את תנאי דליפת שיווי המשקל האופטימליים כדי להשיג חלבוני יעד ברמת טוהר- גבוהה.

 

4. מקרי יישום קלאסיים

הסרת DNA, וירוסים, חלבוני התא המארח ואנדוטוקסינים

לכידת פלסמידים, וירוסים, חומצות גרעין וחלבונים, כמו גם טיהור של אוליגונוקלאוטידים

 

5. זרימת עבודה הפעלה

5.1: הכנת ציוד והרכבה

5.1.1 יש להתקין את מודול הכרומטוגרפיה של הממברנה על מערכת הכרומטוגרפיה AKTA באופן דומה לעמודות שרף ארוזות, תוך הקפדה על כיוון הזרימה עם החצים וכיוון הכניסה. חבר באמצעות מחברי Luer או אביזרי מהדק.

5.1.2 הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/min והשתמש במאגר שיווי משקל כדי לטהר אוויר. המשך לשטוף עד שלא נצפו בועות ביציאה, ואז חבר את יציאת החדיר למערכת הכרומטוגרפיה

5.2:טיפול לפני-שימוש

5.2.1: הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/min ובצע טיפול- מקדים עם 0.5 M NaOH עבור יותר מ- 5 MV כדי להבטיח שהממברנה מגיעה לשיווי משקל.

5.2.2: תחת אותו קצב זרימה, המשך טיפול מוקדם- עם חיץ שיווי משקל (1× PBS) במשך יותר מ-5 MV כדי להבטיח שהממברנה מגיעה לשיווי משקל.

5.3 תהליך כרומטוגרפיה

5.3.1

הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/min ו--טפל מראש עם חיץ שיווי משקל במשך יותר מ- 5 MV עד שהממברנה מגיעה לשיווי משקל.

5.3.2

לאחר שהדגימה עברה סינון- מראש דרך מסנן של 0.22 מיקרומטר, טען את הדגימה עד להשלמת הטעינה או הגעה לקיבולת הטעינה של הכרומטוגרפיה.

5.3.3

שטפו עם חיץ שיווי משקל במשך יותר מ-10 MV עד שספיגת ה-UV יורדת לרמת הבסיס.

5.3.4

השתמש בשחרור שיפוע או בפליטה ליניארית בהתאם לתכנון התהליך, ואסוף דגימות בשברים לפי הצורך.

5.4,CIP טיפול לאחר-שימוש - CIP של מכשיר כרומטוגרפיה ממברנה

5.4.1

הגדר את קצב זרימת הכניסה ל-5-10 MV/min ובצע טיפול ניקוי-ב-מקום (CIP) עם 0.5 M NaOH במשך יותר מ- 10 MV עד שספיגת ה-UV תרד מתחת לקו הבסיס.

5.4.2

לאחר כביסה במחזור של 30 דקות, עבור לשטיפת מים עד שה-pH הוא בין 7-8, ולאחר מכן המשך לנקות עם 20% אתנול עד שהמוליכות נשארת כמעט קבועה.

5.5, אחסון כרומטוגרפיה של ממברנה:

לאחר השימוש והשלמת ה-CIP, ניתן להסיר את מודול הממברנה ולאחסן אותו על ידי השרייה ב-20% אתנול, או לאחסן באינטרנט בטמפרטורת החדר בתמיסת אתנול של 20%. יש לבדוק את תמיסת האתנול 20% ולהחליפה מעת לעת.

 

6. מידע הזמנה

מסנן קפסולות כרומטוגרפיה מסוג DEAE-חלש החלפת אניונים

	סולם-מעבדה	בקנה מידה קטן	סולם פיילוט	סולם ייצור
דגם מוצר	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
נפח ממברנה	0.2 מ"ל	5 מ"ל	400 מ"ל	5L

תגיות פופולריות: deae כרומטוגרפיה של חילופי אניונים חלשים, סין, ספקים, יצרנים, מפעל, סיטונאי, בתפזורת, במלאי, מדגם חינם