תהליך טיהור במורד הזרם של חיסון נגד שלשול חזיר

שלשול היא אחת משלוש המחלות העיקריות שגרמו להפסדים כלכליים גדולים לתעשיית החזירים בסין. ישנם גורמים רבים הגורמים לשלשול אצל חזירים, והגורמים הוויראליים הם החמורים ביותר. חזירים בכל הגילאים יכולים להידבק, במיוחד חזרזירים יונקים, ושיעור התמותה לאחר ההדבקה יכול להגיע ליותר מ-50%. וירוס מגפת חזירים (PEDV) ו- Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus (TGEV) נפוצים בעולם, ושני הנגיפים יכולים להידבק בנפרד או בשילוב. נכון לעכשיו, אין תרופות ספציפיות לטיפול ב-PEDV ו-TGEV, והמניעה והשליטה של ​​שלשול חזיר הם בעיקר חיסונים מסחריים.

החיסונים המסורתיים של שלשולים ממגיפת חזירים כוללים בעיקר חיסון מומת מנגיף שלם וחיסון חי מוחלש. מבחינה קלינית, נעשה שימוש נפוץ בחיסון טנדם מומתם של PEDV ו-TGEV או חיסון מוחלש, ובחיסון משולש מומתם של PEDV, TGEV ו-RV (RV) או חיסון מוחלש, בעיקר חיסון טנדם PEDV ו-TGEV.

כיום, ישנם חיסונים רבים נגד שלשולים ממגיפת חזירים בסין.

תהליך הייצור של חיסונים מומתים ומוחלשים דומה, הכולל בעיקר חמישה שלבים של תרבית פתוגנים, השבתה או מוחלשת של פתוגנים, מיצוי וטיהור של פתוגנים, הכנת ואריזת חיסונים ובקרת איכות חיסונים. מאמר זה מציג בעיקר את ההליך של טיהור פתוגנים.

הַבהָרָה

מטרת הבירור היא להבטיח הסרה של פסולת תאים ואגרגטים גדולים אחרים של חלקיקים. בייצור תרבית תאים של מגוון ארס, בנוסף להכיל מספר רב של חלקיקי וירוס, ישנם פסולת רבים של רקמת התא ומוצרים מטבוליים וזיהומים אחרים, מה שהופך את הארס במצב של מעונן או מעונן למחצה, הישיר שימוש בפעולת ריכוז ארס זו יגרום בקרוב לחסום את קרום האולטרה-פילטרציה, ואינו יכול להשלים את ריכוז הארס, וכתוצאה מכך גרוטאות ממברנת האולטרה-סינון. לכן, לפני ריכוז הארס, יש לברר אותו, מה שנעשה לרוב על ידי צנטריפוגה במהירות נמוכה וסינון ממברנה. יש לציין כי בעת שימוש בטכנולוגיית הפרדת ממברנה, בשל החומר הממברנה הוא לעתים קרובות עם אלקטרושליליות או קבוצות הידרופוביות, יש צורך לחקור האם לחומר של הממברנה יש ספיחה לחלקיקי הנגיף.

שלב בירור יעיל דורש שילוב של יכולת הסרת חלקיקים מוצקים גבוהה ותפוקת מוצר גבוהה, הגברה קלה והגנה על יחידות הפעלה מאוחרות יותר. כיום, נעשה שימוש בפילטר עמוק לצורך פעולת ההבהרה.

עם זאת, כאשר קנה המידה של הטיפוח גדול מדי, יידרש מספר רב של ממברנות סינון עמוקות, וכתוצאה מכך לעלייה משמעותית בעלות החומרים המתכלים. יחד עם זאת, הצפיפות הגבוהה של תרבית תאים תפחית את העומס של קרום המסנן העמוק, וכתוצאה מכך עלויות מוגברות ודילול מוצר מוגזם.

שיטת המיקרו-פילטרציה משתמשת בעיקר במכשיר סינון זרימה משיקית, ורכיבי הממברנה הם קסטות קרום שטוח וסיבים חלולים. סינון זרימה טנגנטיאלית (TFF) מונע על ידי הפרש הלחץ הטרנסממברני. חומרים וזיהומים קטנים מגודל הנקבוביות של הממברנה עוברים דרך הממברנה, בעוד זיהומים כגון תאים עם חלקיקים גדולים יותר נלכדים. גודל הנקבוביות של הממברנה המשמשת למיקרו סינון הוא {{0}}.45/0.22μm. מיקרו סינון זרימה משיקית של סיבים חלולים יכול לעבד ישירות נוזל עם תכולת מוצק גבוהה, כגון מדיום תרבית תאים בצפיפות גבוהה, יכול לבטל שלבי צנטריפוגה וסינון מקדים עם פחות שלבים ותפעול פשוט, ניתן להשתמש בממברנה שוב ושוב באמצעות ניקוי, הפחתת השקעת ציוד ותפעול עלויות, בהתאם לדרישות של ייצור אוטומטי מודולרי.

ריכוז וטיהור

לאחר בירור ראשוני, מצע התרבות הנגיף עדיין מכיל מספר רב של זיהומים, כולל חלקיקים פגומים, מעטפת נגיפית, ציטוטוקסין, מדיום, סרום ושברי תאים וכו'. אם זיהומים אלו יוזרקו לבעלי חיים, הם לא רק ישפיעו על היעילות של החיסון, אך גם לגרום לתגובה חיסונית חזקה של המארח, ואף להוביל למוות של בעלי החיים המחוסנים. לכן, יש צורך בריכוז וטיהור כדי להסיר זיהומים כגון הטרופרוטאינים ושברי תאים, לשפר ולעורר תגובות חיסוניות יעילות, להפחית את כמות החיסון בשימוש ולהפחית תגובות שליליות.

עקרון טיהור הנגיף: לשמור על הפעילות הביולוגית וההדבקות של הנגיף כהנחת היסוד, להסיר את זיהומי הנגיף ולחלץ את הטוהר הגבוה של הנגיף.

כיום, שיטות הריכוז והטיהור העיקריות המשמשות בייצור בקנה מידה גדול הן אולטרה סינון.

שיטת אולטרה סינון, משתמשת בעיקר במכשיר אולטרה סינון זרימה משיקית, מערכת סינון סיבים חלולים וציוד סינון אחר, בנסיבות רגילות, יישום שיטת האולטרה סינון יכול לגרום לווירוס להתרכז יותר מ-100 פעמים, שיעור ההסרה של ההטרופרוטאינים עד 99%. ביניהם, לטכנולוגיית סינון ממברנות סיבים חלולים יש יתרונות של כוח גזירה קל ונמוך, סתימה קלה, פעולה גמישה, חיים ארוכים ועלות נמוכה והגברה קלה, לכן מומלץ לבחור בסיבים חלולים לריכוז וטיהור הווירוסים.

כאשר משתמשים בשיטת אולטרה סינון לריכוז וטיהור, חשוב מאוד לבחור את גודל נקבוביות הממברנה המתאים, אשר קובע ישירות את היעילות ואיכות הריכוז. מצד אחד, יש צורך לבחור את פתח הממברנה כדי ללכוד ביעילות את מולקולות המטרה כדי להבטיח את התשואה, ומצד שני, יש לשקול במלואה את השפעת ההסרה ומהירות העיבוד של ההטרופרוטאינים. לכן, העיקרון הטוב ביותר הוא לבחור את הממברנה בעלת גודל הנקבוביות הגדול ביותר שיכולה ללכוד את מולקולת המטרה, ולנסות לבחור את קרום המסנן עם פיזור אחיד של גודל הנקבוביות.

וירוס מגיפת חזירים (PEDV) ונגיף גסטרואנטריטיס מועבר (TGEV) הם שניהם נגיפים, שהם כדורים פולימורפיים, עם קוצים דמויי קוצים הפוכים, הנעים בקוטר בין 60 ל-190 ננומטר. מחלת רוטה היא מחלה זואונוטית שבה רוטה וירוס (RV) הוא בעל מראה דמוי גלגל וקוטרו כ-70 ננומטר. בדרך כלל ניתן ליירט את שלושת הווירוסים הללו באמצעות 100-750ממברנות אולטרה סינון של צמצם kd.

Guidling Technology הוא מיזם היי-טק לאומי המתמקד בביו-פרמצבטיקה, תרבית תאים, טיהור וריכוז של ביו-רפואה, אבחון ונוזלים תעשייתיים. פיתחנו בהצלחה מכשירי סינון צנטריפוגליים, קלטות אולטרה סינון ומיקרו סינון, מסנן וירוסים, מערכת TFF, מסנן עומק, סיבים חלולים וכו' העונים במלואם על תרחישי היישום של ביו-פרמצבטיקה, תרבית תאים וכן הלאה. הממברנות ומסנני הממברנות שלנו נמצאים בשימוש נרחב בריכוז, מיצוי והפרדה של סינון מקדים, מיקרו-פילטרציה, אולטרה-פילטרציה וננו-סינון. קווי המוצרים הרבים שלנו, החל מסינון מעבדה קטן וחד פעמי ועד למערכות סינון ייצור, בדיקות סטריליות, תסיסה, תרבית תאים ועוד, עונים על צורכי הבדיקה והייצור. Guidling Technology מצפה לשתף פעולה איתך!